1

Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu chế tạo kit multiplex realtime PCR phát hiện đồng thời 3 tác nhân virus phục vụ ghép tạng tại Hà Nội

2

3

4

Mã số nhiệm vụ (nếu có): CT08/09-2022-3

5

Tên tổ chức chủ trì: Bệnh viện Quân y 103

6

Cơ quan chủ quản: Bộ Y tế

7

Chủ nhiệm nhiệm vụ: ThS Nguyễn Giang Nam

8

Danh sách cá nhân tham gia nhiệm vụ: Tống Thọ Thắng PGS. TS. Nguyễn Thái Sơn TS. Tạ Việt Hưng ThS. Hoàng Xuân Cường BS. Vũ Hồng Anh BS. Bàn Thị Dần CN. Nguyễn Phúc Đạo CN. Nguyễn Thị Phương Hải CN. Nguyễn Thị Nhung CN. Đỗ Thị Nhung KTV. Nguyễn Thị Hường CN. Nguyễn Thanh Tùng CN. Nguyễn Thị Thanh Hoa KTV. Lê Xuân Bách KTV. Nguyễn Đức Việt TS. Nguyễn Văn An ThS. La Quang Hổ ThS. Lê Trọng Đức ThS. Nguyễn Hùng Cường ThS. Nguyễn Quang Chiến ThS. Lưu Thị Vũ Nga ThS. Bùi Văn Tuấn ThS. Trương Quý Kiên ThS. Đỗ Mạnh Hà ThS. Vũ Văn Huỳnh

9

Mục tiêu nghiên cứu:

10

Tóm tắt nội dung nghiên cứu chính: Nội dung 1: Nghiên cứu tổng quan
Nội dung 2: Xây dựng quy trình thu thập, vận chuyển và bảo quản mẫu cho xét nghiệm tác nhân gây bệnh
Nội dung 3: Thu thập mẫu, xét nghiệm sàng lọc lựa chọn mẫu dương và mẫu âm
Nội dung 4: Xác định vùng gen bằng kỹ thuật giải trình tự các mẫu dương với CMV, PB19 và BKV thu thập được
Nội dung 5: Tổng hợp và đánh giá chất lượng mẫu panel chuẩn của 03 virus CMV, PB19 và BKV
Nội dung 6: Thiết kế và tổng hợp primer, probes phát hiện 03 chủng virus CMV, PB19 và BKV
Nội dung 7: Xây dựng quy trình chế tạo kit multiplex realtime PCR phát hiện đồng thời 3 tác nhân virus (Cytomegalo virus, Parvovirus B19, BK virus) phục vụ ghép tạng tại Hà Nội.
Nội dung 8: Đánh giá chất lượng, xây dựng tiêu chuẩn cơ sở và hướng dẫn sử dụng của bộ kit multiplex realtime PCR phát hiện đồng thời 3 tác nhân virus (Cytomegalo virus, Parvovirus B19, BK virus) phục vụ ghép tạng tại Hà Nội.
Nội dung 9: Đánh giá so sánh chất lượng bộ sinh phẩm với bộ kít thương mại.

11

Lĩnh vực nghiên cứu: Vi sinh vật học y học

12

Mục tiêu kinh tế xã hội của nhiệm vụ:

13

Phương pháp nghiên cứu: 1. Thiết kế nghiên cứu: nghiên cứu thực nghiệm labo
  2. Các phương pháp nghiên cứu được sử dụng trong đề tài này bao gồm:
        - Phương pháp tổng hợp y văn
        - Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm
        - Phương pháp xử lý thống kê.
    3. Các phương pháp kỹ thuật sử dụng
         Các phương pháp, kỹ thuật cụ thể sẽ được sử dụng trong đề tài này bao gồm:
- Phương pháp thu thập mẫu
- Phương pháp tách chiết DNA tổng số; DNA plasmid
- Phương pháp dự đoán các đoạn gen chỉ thị bằng các phần mềm tin sinh học.
- Phương pháp thiết kế mồi, thiết kế các đầu dò (Probe) phát hiện các đoạn bảo thủ trong các vùng gen đặc hiệu của CMV, PB19, BKV.
- Phương pháp tách chiết DNA tổng số
- Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction); Realtime PCR; Multiplex Realtime PCR
- Phương pháp điện di DNA trên gel agarose
- Phương pháp ghép nối gen vào vector tách dòng:
+ Xử lý đoạn DNA thu được bằng các enzyme giới hạn
+ Xử lý vector với enzyme tương ứng
+ Tinh sạch các đoạn DNA, vector sau khi xử lý với enzyme giới hạn
+ Phản ứng ghép nối đoạn DNA vào vector
+ Biến nạp sản phẩm lai vào tế bào khả biến chủng E.coli DH5a
+ Tách plasmid từ khuẩn lạc
+ Chọn các plasmid tái tổ hợp mang đoạn DNA quan tâm
+ Xác định trình tự kết cấu gen trong vector
- Phương pháp đọc trình tự DNA trên máy đọc trình tự tự động và phân tích kết quả bằng phần mềm chuyên dụng.
- Phương pháp tạo multiplex realtime-PCR và tối ưu hóa phản ứng.
- Phương pháp tạo mẫu chứng dương DNA từ plasmid
- Phương pháp tạo panel mẫu chứng dương và chứng âm cho đánh giá độ nhậy, độ đặc hiệu của kit chẩn đoán.
     Đạo đức trong nghiên cứu:
            Nghiên cứu sẽ tuân thủ đầy đủ các quy định về đạo đức trong nghiên cứu Y sinh học theo quy định của Bộ Y tế. Các quy trình thử nghiệm được thực hiện theo quy định và hướng dẫn phù hợp. Các nội dung nghiên cứu liên quan đến bệnh nhân được thông qua hội đồng đạo đức trong nghiên cứu y sinh của đơn vị chủ trì đề tài.

14

Sản phẩm khoa học và công nghệ dự kiến:

15

Địa chỉ và quy mô ứng dụng dự kiến: Sản phẩm nghiên cứu của đề tài, kỹ thuật chuyển giao trước hết sẽ được áp dụng ở Bệnh viện Quân y 103, Học viện Quân y, và các cơ quan phối hợp nghiên cứu thực hiện đề tài nghiên cứu này và sau đó sẽ được chuyển giao đến các đơn vị thực hiện nhiệm vụ trên địa bàn Hà Nội khi có nhu cầu.

16

Thời gian thực hiện: 0 tháng (từ 01/07/2022 đến 01/12/2024)

17

Kinh phí được phê duyệt: 0 triệu đồng
trong đó:

18

Quyết định phê duyệt: số Số 2633/QĐ-UNBD ngày 28/7/2022 ngày 28 tháng Tháng 7 năm 2022

19

Hợp đồng thực hiện: số ngày 01 tháng Tháng 1 năm 1970