Dimer hóa protein dung hợp với rhau bởi g-quadruplex có cấu trúc song song

Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Chỉ số đề mục

Lĩnh vực nghiên cứu

Hoá lý

Dạng tài liệu

Tác giả

Trương Thị Tinh Tươm; Nguyễn Đắc Nguyên Phúc; Phan Hùng Việt; Đặng Thanh Dũng; Phan Thị Phượng Trang; Phan Thị Phượng Trang⁽¹⁾;

Nhan đề

Dimer hóa protein dung hợp với rhau bởi g-quadruplex có cấu trúc song song

Nhan đề tiếng anh

Dimerization of rhau-fused proteins by parallel g-quadruplex

Nhan đề dịch tiếng Anh

Dimerization of rhau-fused proteins by parallel g-quadruplex

Nguồn trích

Tạp chí Khoa học - Đại học Sư phạm TP Hồ Chí Minh

Năm xuất bản

2021

Số

Trang

548-558

ISSN

1859-3100

Từ khóa

CFP; Dimer hóa, FRET; G-quadruplex; RHAU; YFP

Từ khóa tiếng anh

CFP; Dimerization; FRET; G-quadruplex; RHAU; YFP

Tóm tắt

Protein dimer có vai trò quan trọng trong hoạt động sống của tế bào như hoạt hóa enzyme, truyền tín hiệu qua các thụ thể và điều hòa biểu hiện gen. Các phương pháp dimer hóa protein bởi các phân tử trung gian ra đời nhằm giúp con người chủ động trong việc điều hòa các quá trình sinh học. G-quadruplex là một phân tử có tiềm năng dimer hóa protein thông qua liên kết đặc hiệu với 2 phân tử RHAU (RNA helicase liên kết với vùng trình tự giàu adenine và uracil). Tuy nhiên đến nay, chức năng này của G-quadruplex vẫn chưa được nghiên cứu rộng rãi. Trong nghiên cứu dưới đây, chúng tôi đã dòng hóa vector pTD14 mang gen mã hóa YFP dung hợp với peptide RHAU và biểu hiện, tinh chế protein RHAU-YFP. Sự dimer hóa hai protein RHAU-YFP và RHAU-CFP thông qua G-quadruplex được kiểm tra bằng phản ứng FRET. Kết quả cho thấy, vector pTD14 đã được dòng hóa thành công có thể được biểu hiện tạo protein RHAU-YFP trong điều kiện nhiệt độ 16OC, nồng độ IPTG 0,05 mM trong 24 giờ. Protein RHAU-YFP được tinh chế một lần qua cột His-Trap. Phản ứng FRET cho thấy G-quadruplex có khả năng dimer hóa protein RHAU-YFP và RHAU-CFP trong điều kiện thí nghiệm và nồng độ G-quadruplex 500 μM cho khả năng dimer hóa cao nhất. Các kết quả trên là tiền đề cho việc ứng dụng G-quadruplex để điều hòa các quá trình sinh học trong nghiên cứu y dược, bảo vệ sức khỏe con người.

Tóm tắt tiếng anh

The dimerization of proteins plays an important role in cellular activities such as enzyme activation, signal transmission through receptors and regulation of gene expression. Methods that mediate protein dimerization are introduced and developed to help regulate biological processes. G-quadruplex is a potential molecule mediating the dimerization of proteins through specifically binding to two RHAU peptides. However, to date, this function of G-quadruplex has not been extensively studied. In this study, we cloned vector pTD14 carrying the yfp gene fusing with RHAU peptide. RHAU-YFP protein was then expressed and purified. Dimerization of this protein and RHAU-CFP protein was mediated by G-quadruplex and observed by FRET reaction. The results showed that RHAU-YFP protein could be expressed from the cloned vector pTD14 under the temperature of 16OC and the IPTG concentration of 0.05 mM in 24 hours. The highest amount of the target protein was yielded with imidazole concentrations between 20 mM and 100 mM when purified through His-tag column. The FRET reaction showed that G-quadruplex was capable of mediating the dimerization of proteins RHAU-YFP and RHAU-CFP under the experimental conditions and G-quadruplex at concentration of 500 μM for the highest dimerization ability. The results can be used for further studies on the application of G-quadruplex to regulate biological processes in medical research.

Kí hiệu kho

TTKHCNQG, CTv 138

Xem toàn văn