BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  17,011,944
  • Công bố khoa học và công nghệ Việt Nam

Dược liệu học; Cây thuốc; Con thuốc; Thuốc Nam, thuốc dân tộc

Trần Thị Minh Nguyệt(1), Bùi Thị Thanh Thảo, Jordan Duy Nguyễn, Tăng Thị Nga, Nguyễn Thùy Trâm, Phạm Bảo Yên

Thiết lập quy trình xử lý mẫu mật ong để thu nhận ADN trực tiếp cho việc phát hiện nhanh Clostridium botulinum typ B

Establishment of a rapid direct DNA preparation procedure for the detection of Clostridium botulinum serotype B from honey

Tạp chí Kiểm nghiệm và an toàn thực phẩm

2022

3

533-541

2615-9252

Tách chiết ADN, LAMP, Clostridium botulinum, Độc tố thần kinh, Mật ong.

DNA extraction, LAMP, Clostridium botulinum, Neurotoxin, honey.

Mật ong là thực phẩm có nguy cơ nhiễm Clostridium botulinum gây ra bệnh ngộ độc thịt. Xét nghiệm phát hiện nhanh vi khuẩn này đóng vai trò quan trọng trong việc đảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm và giám sát tình hình ngộ độc thực phẩm. Do vi khuẩn có khả năng tồn tại ở dạng bào tử với mật độ thấp, các phương pháp phát hiện phải bắt đầu với việc nuôi cấy tăng sinh vi khuẩn trước khi tiến hành xét nghiệm. Điều này yêu cầu thời gian dài, quy trình chuẩn bị phức tạp, và có khả năng bỏ sót vi khuẩn do không có môi trường chọn lọc thích hợp. Vì vậy, mục tiêu của nghiên cứu là thiết lập được phương pháp phát hiện nhanh Clostridium botulinum typ B trực tiếp từ mật ong không qua nuôi cấy bằng cách thu nhận ADN tổng số dùng làm khuôn cho phản ứng khuếch đại đoạn gene mã hóa độc tố thần kinh botulinum BoNT/B. Với 6 mẫu mật ong cung cấp bởi Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương đã cho kết quả dương tính bằng PCR từ khuẩn lạc sau khi tăng sinh, ba phương pháp thu nhận ADN sử dụng kit tách chiết Exgene, sốc nhiệt và vi hạt đều cho tín hiệu khuếch đại.
Hơn nữa, khi kết hợp với kỹ thuật khuếch đại đẳng nhiệt qua vòng lặp LAMP, tổng thời gian xét nghiệm có thể được rút ngắn xuống dưới 2 giờ từ khi nhận mẫu. Ngoài ra, chúng tôi nhận thấy hiện tượng ức chế phản ứng PCR bởi nền mẫu mật ong và khuyến nghị cần pha loãng ADN từ 5-10 lần. Bên cạnh ưu điểm về mặt thời gian và quy trình đơn giản, phương pháp thu nhận ADN trực tiếp từ mẫu mật ong còn có tính cơ động cao, có thể thực hiện ngay tại hiện trường.

Honey is at risk of contamination with Clostridium botulinum that causes botulism. Rapid detection of the pathogen in honey is important in food safety assurance and food poisoning surveillance. C. botulinum is capable of forming spores at low concentration; thus, regular detection methods must begin with an enrichment step before the main procedure.
This additional step requires long time, complicated preparation, and might fail due to improper selective media. Therefore, this study aimed to establish a rapid detection procedure for C.  botulinum serotype B directly from honey without enrichment culture by obtaining total DNA to use as template for the amplification of a fragment from botulinum neurotoxin type B (BoNT/B) encoding gene. Using 6 honey samples provided by the National Institute of Hygiene and Epidemiology with positive PCR results after enrichment, all three DNA extraction methods including Exgene extraction kit, freeze-thaw cycling and bead beating, showed amplification signals. Furthermore, when combined with the isothermal loop-mediated amplification, the total time could be shortened to less than two hours since collection. In addition, we observed PCR inhibition by the honey matrix and recommended dilution of the sample 5-10 times for the reaction. With the advantages of rapid and simple procedure, direct DNA extraction from honey could be used in field.

TTKHCNQG, CTv 165

Xem toàn văn