Gen mã hoá protein vỏ VP28 có trọng lượng phân tử 28 kDA khi phân tích trên SDS-PAGE của virus gây hội chứng đốm trắng (WSSV) trên tôm sú ở Việt Nam đã được dòng hoá và biểu hiện trong E. coli. Gen VP28 được khuếch đại bằng PCR sử dụng khuôn DNA của tôm đã được kiểm tra có bệnh đốm trắng với cặp mồi VP28F có chứa vị trí nhận biết của enzyme hạn chế BamHI và VP28R có chứa vị trí nhận biết của enzyme hạn chế EcoRI. Sản phẩm khuếch đại được chèn vào plasmid biểu hiện pGEX-2TK tại vị trí cắt hạn chế BamHI và EcoRI ở phía cuối của gen GST tạo thành plasmid pGEX-2TK tái tổ hợp có mang gen VP28 được đặt tên là pG-VP28. Việc so sánh sự tương đồng của gen VP28 và trình tự amino acid của protein VP28 đã được phân lập ở Việt Nam với 12 trình tự khác đã được công bố trên ngân hàng gen cho thấy không có sự sai khác lớn giữa các trình tự. Plasmid pG-VP28 được biến nạp vào tế bào E.coli BL21 tạo thành dòng tế bào E.coli BL21 mang plasmid pG-VP28. Dòng tế bào này được nuôi cấy và cảm ứng biểu hiện bằng IPTG để tạo protein VP28 dưới dạng dung hợp với GST (VP28-GST) có trọng lượng phân tử 54kDa, bằng tổng trọng lượng của protein VP28 (28kDa) và đoạn GST (26kDa). Sự biểu hiện của VP28-GST được kiểm chứng bằng phương pháp điện di trên SDS-PAGE. Protein dung hợp VP28-GST đã được tinh chế bằng sắc ký ái lực chuyên biệt trên cột glutathione sepharose. Protein dung hợp được thu nhận trong điều kiện trung tính và không biến tính bằng chất glutathion khử nên vẫn đảm bảo được cấu trúc và chức năng của protein
Lọc theo danh mục
Lượt truy cập :
14,926,724
Xem toàn văn