BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ
HỆ THỐNG THÔNG TIN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ

Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  14,856,119

76

Vi sinh vật học y học

Nguyễn Quốc Thái; Nguyễn Lê Thanh Huyền; Mai Huỳnh Như; Thái Khắc Minh; Mai Huỳnh Như(1); 

Tạo dòng và biểu hiện interleukin-2 người dung hợp với SUMO trên Escherichia coli

Expression of human interleukin-2 fused with SUMO in Escherichia coli

Tạp chí Y học Việt Nam (Tổng hội Y học Việt Nam)

2023

1B

69-73

1859-1868

Interleukin-2; Tái tổ hợp; pET-SUMO

Interleukin-2; Recombinant; pET-SUMO; Escherichia coli

Interleukin-2 (IL-2) đang được quan tâm trong điều trị ung thư và các bệnh tự miễn. Tuy nhiên, ở Việt Nam, nguồn IL-2 dùng cho các thử nghiệm in vitro có giá thành cao. Mục đích: tạo được IL-2 người tái tổ hợp dạng dung hợp với tag SUMO trên Escherichia coli. Phương pháp: Tạo dòng chủng E. coli BL21(DE3) mang plasmid tái tổ hợp pET-SUMO-il2 có khả năng biểu hiện IL-2 người ở dạng dung hợp với SUMO. Khảo sát các điều kiện nuôi cấy để thu protein dạng tan: môi trường (LB, TB, ZYP-5052); nồng độ IPTG (0,02; 0,1; 0,5 mM); nhiệt độ (25 °C và 37 ℃). Tinh chế IL-2 dạng dung hợp bằng sắc ký ái lực cố định ion kim loại (IMAC). Kết quả: Chủng E. coli BL21(DE3) mang plasmid tái tổ hợp pET-SUMO-il2 có khả năng tạo IL-2 dạng dung hợp với hiệu suất cao trong môi trường TB cảm ứng với IPTG 0,1 mM ở 25 ℃. Từ 200 mL dịch nuôi cấy tinh chế thu được khoảng 108 mg protein. Kết luận: Nghiên cứu đã tạo dòng thành công chủng E. coli BL21(DE3) mang plasmid tái tổ hợp pET-SUMO-il2 có khả năng tạo IL-2 tan ở dạng dung hợp với tag SUMO với hiệu suất cao và được tinh chế thành công qua cột Ni Sepharose.

Interleukin-2 (IL-2) is used as a therapeutic agent in the treatment of cancer and autoimmune diseases. However, in Vietnam, the price of IL-2 used for in vitro experiments is expensive. Objectives: This study aims to express recombinant human IL-2 fused with SUMO in Escherichia coli. Methods: Plasmid pET-SUMO-il2 was transformed into E. coli BL21(DE3) for the expression of IL-2 with SUMO tag. Expression conditions for optimal soluble recombinant IL-2 were examined, including culture medium (LB, TB, ZYP-5052); IPTG concentration (0.02, 0.1, and 0.5 mM); culture temperature (25°C and 37℃). The recombinant IL-2 fused with SUMO tag was purified by immobilized metal affinity chromatography method (IMAC). Results: The transformed bacteria can express SUMO-IL-2 with high yield in TB medium induced by 0.1 mM IPTG at 25°C. From 200 mL of bacterial culture, we obtained approximately 108 mg of purified protein by IMAC. Conclusions: In this study, we have successfully transformed E. coli BL21(DE3) with the recombinant plasmid pET-SUMO-il2. The bacteria could express soluble SUMO-IL-2 with high yield and the pure protein was obtained by 1-step purification using Ni Sepharose column.

TTKHCNQG, CVv 46

Xem toàn văn