Lọc theo danh mục
  • Năm xuất bản
    Xem thêm
  • Lĩnh vực
liên kết website
Lượt truy cập
 Lượt truy cập :  14,856,398

62

Công nghệ sinh học

Đặng Thu Quỳnh; Nguyễn Huy Hoàng; Nguyễn Ngọc Lan; Lê Việt Hoàng; Đỗ Hữu Nghị; Đỗ Hữu Nghị(1)

Tách dòng, biểu hiện, và khảo sát đặc tính enzyme laccase từ nấm mục trắng Pleurotus pulmonarius MPN18

Cloning, Experession, and Characterization of a Laccase from the White Rot Fungi Pleurotus pulmonarius MPN18

Tạp chí Khoa học tự nhiên và công nghệ – Đại học Quốc gia Hà Nội

2023

02

59-67

2615-9317

Nấm mục trắng; Biểu hiện gen; Laccase

White rot fungi; Expression; Laccase; Pleurotus pulmonarius MPN18

Laccase (EC 1.10.3.2) là enzyme thuộc họ oxidase, có vai trò quan trọng trong quá trình oxy hóa nhiều loại cơ chất chứa vòng thơm, đặc biệt là lignin, phenol, polyamin, và các aryl diamin cũng như một số các ion vô cơ khi có mặt của oxy. Laccase được ứng dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực khác nhau, đặc biệt trong ngành công nghiệp dệt, nhuộm, và xử lý ô nhiễm môi trường. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã tách dòng và biểu hiện thành công cDNA của gene laccase từ nấm mục trắng Pleurotus pulmonarius MPN18 (PpLac). cDNA của gene laccase (có kích thước 1566 bp) được gắn vào vector pET 21a (+) và biểu hiện trong E. coli BL21, sau đó enzyme được tinh sạch qua cột HisTrapTM sp 5mL. PpLac tinh sạch có hoạt độ 899,8 U, hiệu suất 74% với độ tinh sạch 15,2 lần, và được kiểm tra bằng điện di SDS-PAGE có trọng lượng phân tử Mw = 55 kDa. Enzyme hoạt động tối ưu ở 50 ºC và pH 4.0. Enzyme giữ hoạt tính ở 20-40 ºC sau 120 phút ủ và pH 4 sau 6 h ủ. Enzyme sẽ được tiếp tục đánh giá tính chất để xem xét khả năng bổ sung hỗn hợp enzyme cho chuyển hóa hiệu quả trong xử lý phụ phẩm nông-lâm nghiệp giàu lignocellulose.

Laccase (EC 1.10.3.2) is an enzyme belonging to the polyphenol oxidase groups, which plays an important role in the oxidation of a wide variety of aromatic substrates, such as lignin, phenols, polyamines, and aryl diamines, as well as a number of other phenolic compounds or inorganic ions in the presence of oxygen. Laccase is widely applied in many fields, especially in the textile industry, dyeing, and environmental pollution treatment. In this study, we have successfully cloned and expressed cDNA coding for laccase from Pleurotus pulmonarius MPN18 (PpLac). cDNA corresponds to the gene laccase (1566 bp) that was inserted into pET 21a(+) vector and expressed in E. coli BL21, and the recombinant enzyme was purified through HisTrapTM sp 5mL column. The purified PpLac had an activity of 899.8 U, a 74% yield with a purity of 15.2 -fold, and was checked by SDS-PAGE with a molecular weight of Mw = 55 kDa. The enzyme displayed optimal activity at 50 ºC, pH = 4.0. It had an optimal activity of 20-40 ºC after 120 min incubation and pH = 4.0 after the incubation in 6 h. In the future, the recombinant enzyme will be characterized for supplementation into an enzyme cocktail for the treatment of lignocellulosic material.

TTKHCNQG, CTv 8